一、儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合以下要求:
1儀器設(shè)備:
φ90玻璃平皿(或塑料平皿);空氣微生物采樣器(固體撞擊式采樣器、離心式采樣器、液體沖擊式采樣器等均可使用,隸屬于固體撞擊式采樣器);
微生物氣溶膠發(fā)生器(由氣泵、油水分離器、流量計、高效過濾器、噴霧器、緩沖瓶等組成);
各種玻璃移液管、吸管、試管、容器瓶等;
計時器(如秒表);
恒溫培養(yǎng)箱;
潔凈工作臺;
高壓蒸汽消毒鍋。
2材料:
胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基;
生理鹽水;
75%酒精;
菌種(宜選用毒性小或沒有毒性,且便于區(qū)別大氣雜菌的特定菌種,常用的有枯草芽孢桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、大腸噬菌體等);
采樣介質(zhì)可選用硅酮類、石油胨類、醇類、糖類、纖維素類、蛋白類、混合類、組織培養(yǎng)液等;
套筒(測定回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口時需要使用,罩住整個人口,使檢漏范圍包括邊框,長度應(yīng)使通過氣流時間為0.5s~1s,
二、透過率應(yīng)按以下方法評價:
在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口進風(fēng)端加設(shè)套筒,在套筒口部發(fā)生微生物氣溶膠,在過濾器出風(fēng)面用浮游菌法采樣,由回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計算得出微生物透過率。
三、檢測步驟應(yīng)符合下列要求:
1.制定方案:明確評價任務(wù),制定詳細的評價方案,包括確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度、潔凈壓縮空氣流量,確定在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期、采樣次數(shù)等,一般可根據(jù)回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過濾效率進行計算。
2.實驗準(zhǔn)備:根據(jù)預(yù)先制定的評價方案,準(zhǔn)備所需材料、儀器設(shè)備,制作采樣培養(yǎng)皿,一般而言,采樣細菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基,采樣病毒用根據(jù)病毒特性配制的采樣介質(zhì)。
3.發(fā)生微生物氣溶膠:將培育好的高濃度微生物溶液,一般為(108~1010) cfu/mL,利用生理鹽水按10 倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度(步驟1確定的濃度),然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶,由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的進風(fēng)端將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。
4.采樣:對于回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口,可在其后的出風(fēng)管道中采樣,離排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的距離根據(jù)實際工程而定,原則上出風(fēng)后有所混合,能近則好,采樣點沿風(fēng)管寬度方向均勻布置3點。采樣周期、采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評價方案執(zhí)行。采樣過程中,不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生,采樣結(jié)束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠,此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液,且需對剩余菌液活性進行涂布法驗證,以修正菌液濃度。
5.培養(yǎng):將采好的平皿立即蓋上蓋,細菌類在(35~37)℃?培養(yǎng)(1~2) d,結(jié)核菌培養(yǎng)3周,真菌在28℃培養(yǎng)3d。上述培養(yǎng)時間可根據(jù)所采樣微生物特性而適當(dāng)調(diào)整,培養(yǎng)的過程中應(yīng)定期觀察培養(yǎng)箱內(nèi)菌落的生長情況,避免培養(yǎng)箱內(nèi)干燥菌落不生長或培養(yǎng)皿內(nèi)菌落過多充分生長匯合等情況的發(fā)生。
6.計數(shù):可以目測、電子顯微鏡、菌落計數(shù)器等對采集到且培養(yǎng)好的菌落進行計數(shù),當(dāng)采到的菌落很多時,在它們未生長匯合前,用顯微鏡及早觀察,將平皿劃成許多相等的部分抽出一部分數(shù)菌,然后乘以所劃份數(shù),即可得出每皿總菌數(shù)。計數(shù)完畢后,可根據(jù)式計算濃度:
C=N/(V·ts)
式中:C-微生物氣溶膠濃度(cfu/L);
N-采樣到的微生物所形成的菌落數(shù)(cfu);
V-微生物采樣器的采樣流量(L/ min) ;
ts-采樣周期(min)。
7.微生物透過率計算:根據(jù)回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度由式可計算得出微生物透過率K :
K=Cd/CU×100%
式中:Cd-回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口后的微生物氣溶膠濃度(cfu/L),可由式(F. 1.3-1)計算得出;
Cu-回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口前的微生物氣溶膠濃度(cfu/L),可根據(jù)微生物溶液濃度Ci (cfu/mL)、菌液消耗容積V (mL)、氣溶膠發(fā)生時間t (min)、風(fēng)口風(fēng)量G(L/min)由式計算得出:
Cu=(C1·V)/(G·t)
8.消毒滅菌:實驗結(jié)束后,需對剩余菌液以及所用各種儀器、設(shè)備、平皿等進行消毒滅菌、酒精擦洗處理。
四、在進行潔凈室生物學(xué)評價時應(yīng)符合以下要求:
1止式試驗前,應(yīng)進行預(yù)備試驗,并對各種儀器進行調(diào)試和標(biāo)定。
2應(yīng)進行陽性對照試驗。
3應(yīng)進行陰性對照試驗。
4應(yīng)在陽性試驗中長菌,陰性試驗組不長菌。
5實驗過程中應(yīng)注意實驗 人員的安全防護,實驗結(jié)束后應(yīng)做好各種儀器、設(shè)備、衣物等的消毒滅菌處理。
6試驗結(jié)束后,需對微生物氣溶膠發(fā)生器內(nèi)的剩余菌液活性進行涂布法驗證,修正式中的菌液濃度。
7采樣周期應(yīng)設(shè)計合理,當(dāng)確定采樣周期存在一定困難時,宜增加采樣次數(shù),每次采樣使用不同的采樣周期。
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